微生物检测过程中的细节问题

发布时间:2019-12-19    来源:环测威   
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        微生物检测过程中的细节问题

  一、稀释液的制作磷酸盐缓冲稀释液
 
  贮存液:
 
  磷酸二氢钾(KH2PO4)34.0g;蒸馏水500mL;用大约175mL的1mol/L氢氧化钠溶液调节pH至7.2(图1-1、1-2),用蒸馏水稀释至1000
 
  mL后贮存于冰箱。
 
  稀释液:
 
  用蒸馏水稀释1.25ml贮存液至1000mL,分装于合适容器,121℃高压灭菌15min。

 
  二、培养基制作
 
  ①计算出所需数量,用电子称、称量纸、药勺来称取。
 
  ②放入比所用蒸馏水大的烧瓶中,使之充分混匀于蒸馏水后加热溶解并煮沸。
 
  ×备注:即使是同一培养基,各个厂家的配制方法多少有些不同,所以一定要充分参照培养基上的说明。
 
  2.1倾注培养培养基:
 
  ·平板计数琼脂等:高压灭菌后保存,使用时加温溶解。·去氧胆酸盐琼脂培养基:使用时将培养基粉未加温溶解。
 
  *备注:倾注培养时,向培养基分注的步骤参照下述的注意事项:
 
  ①样液稀释以及从接种到培养基混合完毕,更好在15分钟以内完成。
 
  ②每个平皿的分注量约15-20ml。分注后将平皿倾斜和旋转使之充分混合,但要注意不要让培养基从平皿内溢出,且不要粘附在平皿壁和盖上。
 
  ③分注时三角烧瓶挂有培养基滴时,下一次分注的培养基可能被烧瓶外壁的细菌污染,所以要用酒精棉擦拭,再将瓶口用火焰灭菌。
 
  2.2平板培养基:
 
  平板培养基是将溶解后的培养基分注15-20ml到无菌平皿里,使之凝固。
 
  ·TCBS琼脂培养基、DHL琼脂培养基;加温溶解后,分注、凝固、干燥表面。为了防止沉淀的发生,加温溶解后要充分混匀(注意不要起泡)。
 
  ·EMB琼脂培养基:高压灭菌后,分注、凝固、干燥表面。
 
  ·卵黄甘露醇高盐琼脂培养基:将鸡蛋放在95%酒精中浸泡1小时左右,用酒精棉(纱布)擦拭蛋壳表面,打开鸡蛋取出卵黄。加入经高压灭菌后冷却到55-60℃培养基里(6%卵黄)搅拌摇匀凝固后干燥表面(搅拌时不要起泡)。若培养基温度过高,卵黄凝固,过低则培养基分注时开始结块,所以操作要迅速。
 
  *备注:分注后将平皿盖打开置于无菌工作台/恒温培养箱内使培养基表面干燥。
 
  干燥时间基准如下:
 
  无菌超净台:15分钟;
 
  37C恒温箱内倒置:20-30分钟。

  深圳市环测威标准技术有限公司可依据标准或行业标准,为客户提供各种微生物的检测及技术咨询服务。


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